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荧光分光光度计与紫外分光光度计属一类产品,结构均由激发光源、单色器、样品室、光电倍 增管和读出(记录)装置所组成。
但是它们光源是不同的,荧光分光光度计多采用高压汞灯、氙灯和?激光光源。
同时,荧光测量多采用激发光和发射光成直角的光路,仪器组件的布置有所不同。
(1)激发光源:要比吸收法中光源强度大。
汞灯:发射强度大、稳定,不需复杂电源,但谱线不连续,数目少,主要用于滤片荧光计。
碘钨灯:提供连续光谱300~700mn。
氙灯:发出射线的强度大,谱线连续,分布于200~700 nm光域内;
且在300~400nm 波段内射线强度几乎相等,但该灯的电源功率要求大,且电源稳定,因此电源结构复杂。
激光:发光强度大,能 大地提高荧光分析的灵敏度。
(2)样品池:
通常由石英池(液体样品用)或固体样品架(粉末或片状样品)组成。
测量液体时,光源与检测器成直角安排;
测量固体时,光源与检测器成锐角安排。
低温荧光测定时在一样品池外套一个液氮的透明石英真空瓶。
(3)单色器:
荧光分光计通常具有两个滤光片:滤光片在光源与样品池之间,滤去不需要的光,让需要的激发光通过。
第二滤光片在样品池与检测器之间,滤去溶剂散射 光、容器表面散射光、杂质发出的光等,让待测物质发射的荧光通过。
荧光分光光度计通常具有两个光栅,位置同滤光片,单色性好。
(4)检测器:
因荧光通常较弱,采用光电倍增管作检测器,灵敏度高。
选择光电倍增管要考虑:响应波长、灵敏度和嗓声水平。
蓝敏管对蛋白质、核酸的测量适用,而红敏管则适用于荧光染料检测。
(5)显示系统:光度表、计算机操作系统等。
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